Whole-Mount In Situ Hybridization Using Microwave Treatment.

چکیده اصلی

In situ mRNA hybridization, which relies on the complementarity between antisense riboprobes and specific RNA populations, was originally used on thin sections with colorimetric dyes to visualize mRNA distribution. The use of fluorescent probes and confocal imaging enabled whole-mount in situ hybridization (WISH) and 3D reconstruction of gene expression domains. Here, we present a versatile protocol based on microwave treatment that results in high and homogeneous hybridization yields. When used with a cell wall marker and tissue clearing, it enables simultaneous visualization of gene expression and cell segmentation across various Arabidopsis organs, including leaves, shoots, roots, and embryos enclosed within integuments. This easy, rapid, robust, and low-cost method also accommodates different detection kits and cytological dyes, and it can be extended to Double WISH for the simultaneous detection of two distinct mRNA targets.

ترجمه فارسی چکیده

Hybridization In Situ mRNA، که بر پایه هم‌خوانی پروب‌های ریز‌آران‌ای معکوس و جمعیت‌های آران‌ای خاص استوار است، در ابتدا برای مشاهده توزیع mRNA با استفاده از رنگ‌های رنگی روی برش‌های نازک به کار می‌رفت. استفاده از پروب‌های فلورسنت و تصویربرداری کانفوکال امکان Hybridization In Situ در مقیاس کل (WISH) و بازسازی سه‌بعدی حوزه‌های بیان ژن را فراهم کرد. در اینجا، ما یک پروتکل چابک مبتنی بر درمان مایکروویو را ارائه می‌دهیم که منجر به بازدهی بالای و یکنواخت Hybridization می‌شود. هنگام استفاده با نشانگر دیواره سلولی و روش‌های روشن‌سازی بافت، این روش امکان مشاهده همزمان بیان ژن و برش‌بندی سلولی در اندام‌های مختلف گیاه آرابی‌دوپسیس، از جمله برگ‌ها، ساقه‌ها، ریشه‌ها و جنین‌های محصور در پوشش‌های داخلی را فراهم می‌کند. این روش آسان، سریع، پایدار و ارزان‌قیمت، همچنین سازگار با کیت‌های تشخیص مختلف و رنگ‌های سیتولوژیک است و می‌تواند برای Hybridization In Situ دوگانه برای تشخیص همزمان دو هدف mRNA متمایز گسترش یابد.

متن کامل اصلی