Alkaline Phosphatase Staining of Embryonic Stem Cells.

چکیده اصلی

Alkaline phosphatase (AP) is a widely utilized histochemical marker for assessing the pluripotent state of embryonic stem (ES) cells. Mouse ES cells maintained in an undifferentiated state exhibit high levels of tissue-nonspecific alkaline phosphatase (TNAP) activity, which sharply declines upon differentiation. AP staining provides a rapid, cost-effective, and reliable method to evaluate ES cell colony morphology, confirm maintenance of pluripotency during routine culture, and monitor the efficiency of differentiation protocols. Here, we describe a detailed protocol for AP staining of mouse ES cells using a chromogenic azo dye coupling method with naphthol AS-BI phosphate substrate and Fast Red Violet LB diazonium salt. This technique produces a vibrant red-purple precipitate in undifferentiated ES cell colonies, while differentiated cells remain unstained, enabling clear visualization and documentation of pluripotency status. The protocol includes optimized fixation conditions that preserve AP enzymatic activity, streamlined staining procedures, and guidelines for image acquisition and interpretation.

ترجمه فارسی چکیده

فسفاز قلیایی (AP) یک نشانگر هیستوشیمیایی گسترده برای ارزیابی وضعیت چندمنظوری سلول‌های بنیادی جنینی (ES) است. سلول‌های موش ES که در حالت غیرمتمایز نگهداری می‌شوند، فعالیت بالایی از فسفاز قلیایی غیراختصاصی بافت (TNAP) را نشان می‌دهند که به شدت در هنگام متمایز شدن کاهش می‌یابد. رنگ‌آمیزی AP روشی سریع، مقرون‌به‌صرفه و قابل‌اعتماد برای ارزیابی ریخت‌شناسی کلونی‌های سلولی ES، تایید حفظ چندمنظوری در فرهنگ عادی و نظارت بر کارایی پروتکل‌های متمایزسازی است. اینجا، یک پروتکل دقیق برای رنگ‌آمیزی AP سلول‌های موش ES با استفاده از روش جفت‌شدن رنگ‌دوزی آزو با زیرساخت فسفات نفتول AS-BI و نمک دیازونیوم سرخ بنفش سریع Fast Red Violet LB توصیف شده است. این تکنیک رسوبی صورتی-بنفش زنده‌ای را در کلونی‌های سلولی ES غیرمتمایز تولید می‌کند، در حالی که سلول‌های متمایز شده بدون رنگ باقی می‌مانند، که امکان مشاهده و مستندسازی وضعیت چندمنظوری را فراهم می‌کند. پروتکل شامل شرایط بهینه‌سازی شده ثابت‌سازی است که فعالیت آنزیمی AP را حفظ می‌کند، روال‌های ساده‌سازی شده رنگ‌آمیزی و دستورالعمل‌های برای به‌دست آوردن و تفسیر تصویر است.

متن کامل اصلی