Immunophenotypic Assessment of Natural Killer Cell Degranulation and Monocyte Function from Cryopreserved Peripheral Blood Mononuclear Cells.

چکیده اصلی

Natural killer (NK) cells and monocytes are central components of the innate immune system, playing critical roles in host defense, immune surveillance, and inflammation. Functional alterations in these cell populations are implicated in cancer, infectious diseases, cardiovascular disease, and responses to environmental and psychosocial stressors. Accurate measurement of NK cell and monocyte distribution and function is therefore essential for both basic and translational immunology. In large-scale or longitudinal studies, cryopreserved peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) are commonly used to enable standardized analyses across time and sites; however, cryopreservation and thawing can adversely affect cell viability and function. This chapter presents a reproducible protocol for the cryopreservation, thawing, and functional assessment of NK cells and monocytes from human PBMCs. PBMCs are cryopreserved using a 9:1 ratio of fetal bovine serum (FBS) and dimethyl sulfoxide (DMSO), allowing long-term storage at ultra-low temperatures while preserving cellular integrity. The thawing process utilizes a nuclease to minimize cell clumping, enhancing cell recovery and viability. Following thawing, PBMCs are prepared for downstream functional assays. NK cell function is assessed using a standard degranulation assay following coculture with K562 target cells, providing a robust measure of cytotoxic capacity. Together, this protocol offers a practical guide for the reliable measurement of NK cell and monocyte distribution and function from cryopreserved PBMCs, supporting high-quality immunological analyses in clinical and population-based research.

ترجمه فارسی چکیده

سلول‌های طبیعی قاتل (NK) و مونوسیت‌ها اجزای اصلی سیستم ایمنی درونی هستند که نقش‌های حیاتی در دفاع میزبان، نظارت ایمنی و التهاب ایفا می‌کنند. تغییرات عملکردی در این جمعیت‌های سلولی در سرطان، بیماری‌های عفونی، بیماری‌های قلبی عروقی و پاسخ‌ها به استرس‌های محیطی و روان‌اجتماعی دخیل هستند. اندازه‌گیری دقیق توزیع و عملکرد NK و مونوسیت‌ها برای ایمنولوژی پایه و ترجمه‌ای ضروری است. در مطالعات مقیاس بزرگ یا طولی، سلول‌های خونی لنفاوی منوسیت‌دار (PBMC) برای تحلیل‌های استاندارد در طول زمان و سایت‌ها استفاده می‌شوند، اما منجمد‌سازی و گرم کردن می‌تواند بر زنده‌مانی و عملکرد سلولی تأثیر منفی بگذارد. این فصل یک پروتکل قابل تکرار برای منجمد‌سازی، گرم کردن و ارزیابی عملکرد NK و مونوسیت‌ها از PBMC انسانی ارائه می‌دهد. PBMC‌ها با نسبت ۹:۱ سرم جنین گاوی (FBS) و دی‌متیل سولفوکسید (DMSO) منجمد می‌شوند تا ذخیره طولانی‌مدت در دماهای بسیار پایین با حفظ یکپارچگی سلولی امکان‌پذیر باشد. فرآیند گرم کردن از یک آنزیم نوکلئاز برای کاهش انبوهی سلولی استفاده می‌کند که بازیابی و زنده‌مانی سلول را افزایش می‌دهد. پس از گرم کردن، PBMC‌ها برای آزمون‌های عملکردی پایین‌دست آماده می‌شوند. عملکرد NK با استفاده از یک آزمون تخلیه استاندارد پس از کشت مشترک با سلول‌های هدف K562 ارزیابی می‌شود که یک معیار قوی از ظرفیت سیتوتوکسیک ارائه می‌دهد. این پروتکل راهنمایی عملی برای اندازه‌گیری قابل اعتماد توزیع و عملکرد NK و مونوسیت‌ها از PBMC منجمد شده ارائه می‌دهد.

متن کامل اصلی