Quantification of Human T Cell Responses to Chlamydia trachomatis: Intracellular Cytokine Staining (ICS) and Activation-Induced Marker (AIM) Assays.

چکیده اصلی

High-resolution characterization of antigen-specific T cell responses is essential for understanding cellular immunity to Chlamydia trachomatis infection in humans. This chapter describes two complementary flow cytometry-based approaches for measuring human antigen-specific T cell responses: intracellular cytokine staining (ICS) and activation-induced marker (AIM) staining. Both assays enable single-cell-level analysis following antigen stimulation but differ in their readouts. ICS quantifies functional cytokine production in response to short- or long-term stimulation, whereas the AIM assay identifies antigen-specific T cells based on transient surface expression of activation markers without fixation or permeabilization, preserving cells for downstream applications. Detailed protocols are provided for peripheral blood mononuclear cell (PBMC) thawing and preparation, short-term or long-term antigen stimulation, and flow cytometry staining, as well as practical considerations for assay selection, experimental controls, optimization, and data acquisition.

ترجمه فارسی چکیده

شناخت با دقت بالا از پاسخ‌های لنفوسیتی خاص آنتی‌ژنی برای درک ایمنی سلولی در برابر عفونت کلامیدیا تراکوماتیس در انسان ضروری است. این فصل دو رویکرد مکمل مبتنی بر سیتوفلوومتری برای اندازه‌گیری پاسخ‌های لنفوسیتی T خاص آنتی‌ژنی انسانی را توصیف می‌کند: رنگ‌آمیزی سیتوکین داخل سلولی (ICS) و رنگ‌آمیزی نشانگرهای تحریک‌یافته (AIM). هر دو روش تحلیل در سطح سلولی را پس از تحریک آنتی‌ژنی امکان‌پذیر می‌کنند، اما در خروجی‌های خود متفاوت هستند. ICS تولید عملکردی سیتوکین را در پاسخ به تحریک کوتاه‌مدت یا بلندمدت کمیت‌سازی می‌کند، در حالی که آزمون AIM لنفوسیت‌های خاص آنتی‌ژنی را بر اساس بیان موقت نشانگرهای تحریک بر سطح سلولی شناسایی می‌کند بدون نیاز به ثابت‌سازی یا نفوذپذیری، که سلول‌ها را برای کاربردهای بعدی حفظ می‌کند. پروتکل‌های دقیقی برای ذوب و آماده‌سازی سلول‌های خون محیطی (PBMC)، تحریک آنتی‌ژنی کوتاه‌مدت یا بلندمدت و رنگ‌آمیزی سیتوفلوومتری، به همراه نکات عملی برای انتخاب آزمون، کنترل‌های آزمایشگاهی، بهینه‌سازی و دریافت داده‌ها ارائه شده است.

متن کامل اصلی