Monitoring Chlamydia trachomatis Development in Polarized Endocervical Epithelial Cells.

چکیده اصلی

Understanding Chlamydia trachomatis infection requires physiologically relevant models tailored to various research questions. One of the main sites of C. trachomatis infection is the columnar epithelium of the endocervix; therefore, a model that accurately mimics the environment of endocervical epithelium is essential. Polarized cell models provide a valuable solution, offering a cost-effective yet biologically relevant alternative to conventional 2D culture systems and more complex and costly 3D or animal models. Immortalized human endocervical epithelial cells (A2EN cells) form a polarized monolayer on transwell membranes, reproducing key in vivo features, including tight junctions, mucus secretion, proinflammatory cytokine production, and hormone receptor expression, when maintained at low passage. This chapter outlines protocols for generating a polarized A2EN culture and assessing polarization through morphological, biochemical, and functional assays. Furthermore, we describe how C. trachomatis development can be monitored in polarized cells through microscopy, flow cytometry, immunofluorescence, and reinfection assays.

ترجمه فارسی چکیده

درک عفونت کلامیدیا تراکوماتیس نیازمند مدل‌های فیزیولوژیک مرتبط است که برای سؤالات مختلف تحقیقاتی تنظیم شده‌اند. یکی از اصلی‌ترین سایت‌های عفونت کلامیدیا تراکوماتیس، اپیتلیال ستونی اندوسرکوسی است؛ بنابراین، یک مدل که محیط اپیتلیال اندوسرکوسی را به دقت شبیه‌سازی کند، ضروری است. مدل‌های سلولی قطبی راه‌حلی ارزشمند ارائه می‌دهند که به عنوان جایگزین ارزان‌قیمت اما بیولوژیک مرتبط برای سیستم‌های کشت دو بعدی سنتی و مدل‌های پیچیده‌تر و گران‌قیمت سه بعدی یا حیوانی عمل می‌کنند. سلول‌های اپیتلیال انسانی اندوسرکوسی جاودانه‌شده (سلول‌های A2EN) یک لایه تک‌سلولی قطبی روی غشاهای ترنسول ایجاد می‌کنند که ویژگی‌های کلیدی درون‌زندگی را بازتولید می‌کنند، از جمله اتصالات تنگ، ترشح مخاط، تولید سیتوکین‌های التهابی‌زا و بیان گیرنده‌های هورمونی، زمانی که در گذر کم نگهداری می‌شوند. این فصل پروتکل‌های ایجاد کشت قطبی A2EN و ارزیابی قطبی‌شدن از طریق آزمون‌های مورفولوژیک، بیوشیمیایی و عملکردی را شرح می‌دهد. علاوه بر این، ما توصیف می‌کنیم که چگونه توسعه کلامیدیا تراکوماتیس در سلول‌های قطبی از طریق میکروسکوپی، سی‌فلو، ایمونوفلوئورسانس و آزمون‌های عفونت مجدد قابل پایش است.

متن کامل اصلی