Rapid and Efficient Genetic Manipulation of Intestinal Organoids Under Transient Two-Dimensional Culture Conditions.

چکیده اصلی

Genetic manipulation of cells represents one of the fundamental techniques in current biological research, essential for elucidating the regulatory mechanisms underlying various biological phenomena, modeling many diseases, and investigating their therapeutic interventions. However, in the context of organoid biology, the manipulation of target genes and the selection of resultant genetically modified clones often encounter significant technical challenges due to the typically low gene introduction efficiency. This difficulty is largely attributed to the three-dimensional culture of organoids within the basement membrane matrix, which can be substantially mitigated by employing transient two-dimensional culture conditions during the introduction of genes. This section describes a method involving the temporary use of two-dimensional culture of intestinal organoids on collagen gel, followed by gene introduction using lipofection or lentiviral vectors. This method allows rapid and efficient genetic manipulation of intestinal organoids and can be applied to organoids from other organs.

ترجمه فارسی چکیده

تغییر ژنتیکی سلول‌ها یکی از تکنیک‌های بنیادی در تحقیقات زیستی است که برای elucidating مکانیسم‌های تنظیمی و مدل‌سازی بیماری‌ها ضروری است. اما در بافت‌های روده‌ای، تغییر ژن‌های هدف و انتخاب کلون‌های تغییر یافته به دلیل کارآیی پایین ورود ژن معمولاً چالش‌های فنی ایجاد می‌کند. این مشکل به دلیل کشت سه بعدی در ماتریس لایه پایه است. استفاده از شرایط موقت کشت دو بعدی می‌تواند این مشکل را به‌طور قابل توجهی کاهش دهد. این بخش روشی را توصیف می‌کند که شامل استفاده موقت از کشت دو بعدی روی ژل کلاژن و سپس ورود ژن با استفاده از لپوفکشن یا وکتورهای لنتی‌وایرال است.

متن کامل اصلی