Comprehensive Stability Assessment of Squalene in a Nanoemulsion Adjuvant and the SpiN-Tec Vaccine: HPLC Quantification, Stress Testing, and Stability Studies.

چکیده اصلی

Squalene-based nanoemulsions are widely used as adjuvants in vaccine formulations, but their stability can be affected by environmental factors such as pH, oxidative stress, temperature, and light. We have produced a squalene nanoemulsion (CTVad1) to support the clinical development of new vaccines. This study aimed to develop and validate an HPLC method for squalene quantification in SpiN-Tec, a recombinant protein vaccine against COVID-19. We also aimed to evaluate the stability of the CTVad1 adjuvant and SpiN-Tec under controlled storage conditions. A reversed-phase HPLC method was developed and validated, and comprehensive forced degradation studies were performed on the raw material and SpiN-Tec under acidic, basic, oxidative, thermal, and photolytic conditions to demonstrate the stability-indicating capability of the method. Physicochemical, morphological, and biological characteristics were assessed, and stability studies of both the vaccine and the CTVad1 adjuvant were performed under accelerated and long-term conditions. The HPLC method was selective, precise, accurate, linear, and robust. Squalene raw material degraded under all tested conditions, whereas formulation in nano-sized globules improved its stability, with degradation observed only under hydrogen peroxide and light exposure. CTVad1 remained stable over time, exhibiting only minor, non-critical changes within the specification limits in both accelerated and long-term stability studies, regardless of the glass packaging used (clear or amber). In addition, the SpiN-Tec vaccine maintained its physicochemical and biological integrity under all tested conditions, with all evaluated parameters remaining within the established specification ranges. Our findings demonstrate that proper formulation, packaging, and storage conditions can preserve squalene stability in nanoemulsion-based vaccines, ensuring the quality, safety, and efficacy of the SpiN-Tec vaccine and its adjuvant throughout shelf life.

ترجمه فارسی چکیده

امولسیون‌های نانویی مبتنی بر اسکوالن به طور گسترده به عنوان عوامل تقویت‌کننده در فرمول‌های واکسنی استفاده می‌شوند، اما پایداری آن‌ها می‌تواند تحت تأثیر عوامل محیطی مانند pH، استرس اکسیداتیو، دما و نور قرار گیرد. این مطالعه به توسعه و اعتبارسنجی یک روش HPLC برای اندازه‌گیری اسکوالن در واکسن SpiN-Tec، یک واکسن پروتئین بازسازی‌شده علیه کووید-19، و ارزیابی پایداری عامل تقویت‌کننده CTVad1 و واکسن SpiN-Tec تحت شرایط ذخیره‌سازی کنترل‌شده پرداخت. روش HPLC معکوس‌فاز توسعه یافت و مطالعات تخریب اجباری جامعی بر مواد اولیه و SpiN-Tec تحت شرایط اسیدی، بازی، اکسیداتیو، حرارتی و فتولیتیک انجام شد تا قابلیت نشانگر پایداری روش اثبات شود. ویژگی‌های فیزیکوشیمیایی، مورفولوژیک و زیستی ارزیابی شد و مطالعات پایداری هر دو واکسن و عامل تقویت‌کننده CTVad1 تحت شرایط شتاب‌دار و بلندمدت انجام شد. روش HPLC انتخابی، دقیق، دقیق، خطی و مقاوم بود. مواد اولیه اسکوالن در تمام شرایط تست تخریب یافت شد، در حالی که فرمولاسیون در کروی‌های نانویی پایداری آن را بهبود داد و تخریب تنها تحت مواجهه با هیدروژن پراکسید و نور مشاهده شد. CTVad1 در طول زمان پایدار ماند و تغییرات جزئی و غیرحیاتی در محدوده مشخصات در هر دو مطالعه پایداری شتاب‌دار و بلندمدت، به استثنای بسته‌بندی شیشه‌ای (شفاف یا شیشه‌ای قهوه‌ای) نشان داد. علاوه بر این، واکسن SpiN-Tec در تمام شرایط تست، پایداری فیزیکوشیمیایی و زیستی خود را حفظ کرد و تمام پارامترهای ارزیابی‌شده در محدوده‌های مشخصات تعیین‌شده باقی ماندند. یافته‌های ما نشان می‌دهند که فرمولاسیون مناسب، بسته‌بندی و شرایط ذخیره‌سازی می‌توانند پایداری اسکوالن در واکسن‌های مبتنی بر نانوامولسیون را حفظ کنند و کیفیت، ایمنی و اثربخشی واکسن SpiN-Tec و عامل تقویت‌کننده آن را در طول عمر انبارداری تضمین کنند.

متن کامل اصلی