Production of Viral Particles from a Chikungunya Virus Infectious Clone.

چکیده اصلی

Chikungunya virus (CHIKV) is a positive-sense single-stranded RNA virus, which poses challenges for its study and genetic manipulation. Because direct mutagenesis of viral RNA genomes is technically impractical, reverse genetics systems are essential tools for investigating viral biology. To enable such approaches, infectious clones containing a full-length cDNA copy of the viral genome are constructed. The cDNA is positioned under the control of a bacteriophage RNA polymerase promoter, allowing commercial RNA polymerases to use the linearized plasmid as a template for the in vitro transcription of full-length viral genomic RNA (gRNA). Importantly, positive-sense viral genomes serve as mRNAs for the translation of viral proteins in a cellular environment, meaning that these transcripts contain all the information required to initiate viral replication. Following transfection into permissive cultured cells, viral proteins are expressed, enabling genome replication and, ultimately, the recovery of infectious particles from the cell supernatant. Here, we describe a detailed procedure for generating CHIKV particles through plasmid linearization, in vitro transcription, and subsequent RNA transfection.

ترجمه فارسی چکیده

ویروس چیکونگونیا (CHIKV) یک ویروس رنا تک‌رشته‌ای مثبت سنس است که چالش‌هایی برای مطالعه و مهندسی ژنتیک آن ایجاد می‌کند. از آنجا که جهش مستقیم ژنوم‌های رنایی ویروس از نظر فنی غیرممکن است، سیستم‌های ژنتیک معکوس ابزارهای ضروری برای بررسی زیست‌شناسی ویروسی هستند. برای فعال‌سازی این رویکردها، کلون‌های عفونی حاوی یک کپی کامل دی‌ان‌ای جی (cDNA) از ژنوم ویروس ساخته می‌شوند. دی‌ان‌ای جی تحت کنترل یک پراموتور پلیمراز رنای باکتری‌افاژ قرار می‌گیرد که به پلیمرازهای رنایی تجاری اجازه می‌دهد از پلاسمید خطی‌شده به عنوان الگوی ترنسکریپتون کامل ژنوم رنایی ویروس (gRNA) در محیط آزمایشگاهی استفاده کنند. به‌طور مهم، ژنوم‌های رنایی مثبت‌سنس به عنوان پیام‌های رنایی (mRNA) برای ترجمه پروتئین‌های ویروسی در محیط سلولی عمل می‌کنند، به این معنی که این ترنسکریپت‌ها تمام اطلاعات مورد نیاز برای آغاز بازتولید ویروس را در بر دارند. پس از ترنسفکشن در سلول‌های کشت قابل قبول، پروتئین‌های ویروسی بیان می‌شوند که امکان بازتولید ژنوم و در نهایت بازیابی ذرات عفونی از سوپرناتانت سلولی را فراهم می‌کنند. در اینجا، یک روش دقیق برای تولید ذرات CHIKV از طریق خطی‌سازی پلاسمید، ترنسکریپتون در vitro و ترنسفکشن رنایی بعدی توصیف شده است.

متن کامل اصلی