A Conditional Knockout Mutant Approach to Study Essential Genes in Chlamydia in Cell Culture and In Vivo.

چکیده اصلی

Identification and characterization of essential Chlamydia-specific factors are vital for the generation of effective therapeutics and vaccines. Despite delays in the development of genetic tools for Chlamydia, significant advancements in Chlamydia genetic manipulation have been made over the last decade and a half, now allowing for the targeted interruption or deletion of chromosomal genes. However, because of the obligate intracellular nature of the bacteria and its unique biphasic developmental cycle, it remains challenging to inactivate essential genes and study the function of their encoded proteins. Here, we describe a method to generate conditional knockout Chlamydia mutants by introducing, prior to gene inactivation, a complementation plasmid containing the gene of interest under the control of an anhydrotetracycline (aTc)-inducible promoter. The chromosomal copy of the gene can then be selectively deleted to produce a conditional knockout mutant in which expression of the gene is controlled with aTc. We detail how this conditional knockout mutant can be used to determine if the targeted gene is essential for Chlamydia infection in cell culture and in vivo.

ترجمه فارسی چکیده

شناسایی و توصیف عوامل اختصاصی کلامیدیا برای تولید درمان‌ها و واکسن‌های مؤثر ضروری است. با وجود تأخیر در توسعه ابزارهای ژنتیکی برای کلامیدیا، پیشرفت‌های قابل توجهی در دستکاری ژنتیکی این باکتری در دو دهه گذشته حاصل شده است که اکنون امکان حذف هدفمند یا قطع ژن‌های کروموزومی را فراهم می‌کند. با این حال، به دلیل ماهیت اجباری این باکتری به عنوان یک موجودیت داخل سلولی و چرخه تکاملی دو فازی منحصر به فرد آن، همچنان چالش‌برانگیز است که ژن‌های ضروری را غیرفعال کرده و عملکرد پروتئین‌های کد شده توسط آن‌ها را مطالعه کرد. در اینجا، ما روشی را برای تولید جهش‌زدایی شرطی کلامیدیا با معرفی یک پلاسمید تکمیل‌کننده حاوی ژن مورد نظر تحت کنترل یک پروموتور تحسینی آنهیدروتتراسایکلین (aTc) قبل از غیرفعال‌سازی ژن، توصیف می‌کنیم. سپس می‌توان کپی کروموزومی ژن را به طور انتخابی حذف کرد تا یک جهش‌زدایی شرطی تولید شود که در آن بیان ژن با aTc کنترل می‌شود. ما جزئیات استفاده از این جهش‌زدایی شرطی را برای تعیین اینکه آیا ژن هدف برای عفونت کلامیدیا در کشت سلولی و در بدن ضروری است، ارائه می‌دهیم.

متن کامل اصلی