PubMed چکیده/رکورد

Lentiviral Transduction of Embryonic Stem Cells.

Benjamin L Kidder• 2027• Methods in molecular biology (Clifton, N.J.)
استودیوی صوتی مقاله

پخش حرفه‌ای فارسی و انگلیسی

در حال بررسی نسخه‌های صوتی ذخیره‌شده…

صوت تولیدشده با هوش مصنوعی است. برای کاربرد علمی یا درمانی، متن و منبع اصلی را بررسی کنید.
خواندن هوشمند فارسی و انگلیسی در حال آماده‌سازی صداهای مرورگر…
تنظیم صدای طبیعی و سرعت

صداهایی که در نامشان «Natural»، «Neural» یا «Online» دیده می‌شود معمولاً طبیعی‌ترند. انتخاب صدا به صداهای نصب‌شده در ویندوز و مرورگر شما بستگی دارد.

چکیده اصلی

Lentiviral vectors provide an efficient and reliable method for stable gene knockdown in embryonic stem cells (ESCs) through RNA interference. Here, we describe a detailed protocol for lentiviral transduction of mouse ESCs using lentiviral shRNA expression vectors. The protocol encompasses lentiviral particle production in HEK-293T packaging cells, determination of viral titer, transduction of ESCs cultured under feeder-free conditions, and selection of stably transduced cells. Additionally, we describe methods for evaluating transduction efficiency using fluorescence microscopy and flow cytometry, as well as for assessing gene knockdown efficacy by quantitative real-time PCR (Q-RT-PCR). This protocol is suitable for functional genomic studies in pluripotent stem cells and can be adapted for other difficult-to-transfect cell types.

نتیجه فارسی

این مقاله یک پروتکل دقیق برای ترنسداکشن ویروسی لنتی‌ویروسال سلول‌های استمبیال موش با استفاده از بردارهای shRNA ارائه می‌دهد. این روش شامل تولید ویروس، تعیین تیتروی، ترنسداکشن سلول‌ها و ارزیابی اثربخشی حذف ژن است.

  • استفاده از ویروس‌های لنتی‌ویروسال برای حذف ژن در سلول‌های استمبیال.
  • تولید ذرات ویروسی در سلول‌های HEK-293T.
  • ارزیابی کارایی ترنسداکشن با میکروسکوپ فلوئورسنت و سیتومتری جریان.
  • ارزیابی اثربخشی حذف ژن با Q-RT-PCR.

ترجمه فارسی چکیده

ویروس‌های لنتی‌ویروسال روشی کارآمد و قابل اعتماد برای حذف ثابت ژن در سلول‌های استمبیال (ESCs) از طریق رونویسی معکوس رنایی (RNAi) ارائه می‌دهند. در اینجا، یک پروتکل دقیق برای ترنسداکشن ویروسی لنتی‌ویروسال سلول‌های استمبیال موش با استفاده از بردارهای بیان shRNA لنتی‌ویروسال توصیف شده است. این پروتکل شامل تولید ذرات ویروسی لنتی‌ویروسال در سلول‌های بسته‌بندی HEK-293T، تعیین تیتروی (تعداد) ویروس، ترنسداکشن سلول‌های استمبیال در شرایط بدون فیدر، و انتخاب سلول‌های ترنسداکشن شده پایدار است. علاوه بر این، روش‌های ارزیابی کارایی ترنسداکشن با میکروسکوپ فلوئورسنت و سیتومتری جریان، و همچنین ارزیابی اثربخشی حذف ژن با PCR زمان واقعی کوانتیتاتیو (Q-RT-PCR) توصیف شده است. این پروتکل برای مطالعات ژنومیک عملکردی در سلول‌های چندقابلیت و قابل تطبیق برای سایر انواع سلول‌های دشوار در ترنسفکشن است.

روش پژوهش

پروتکل شامل تولید ذرات ویروسی لنتی‌ویروسال در سلول‌های بسته‌بندی HEK-293T، تعیین تیتروی، ترنسداکشن سلول‌های استمبیال در شرایط بدون فیدر و انتخاب سلول‌های ترنسداکشن شده پایدار است.

محدودیت‌ها

محدودیت‌ها در متن گزارش نشده‌اند.

استخراج ساختاریافته از متن منبع

نمای PICO و پیامدها

جمعیت
سلول‌های استمبیال موش (mouse ESCs).
مداخله/مواجهه
ترنسداکشن ویروسی لنتی‌ویروسال با استفاده از بردارهای بیان shRNA.
مقایسه
مورد مقایسه قرار نگرفته است.
حجم نمونه
گزارش نشده است.

متن کامل اصلی

متن در JumpToDate ذخیره نشده است.

برای بررسی دسترسی کتابخانه‌ای یا خرید، رکورد اصلی را باز کنید.

رفتن به منبع اصلی

کلیدواژه‌ها

Flow cytometryGene knockdownHEK-293T cellsLentiviral vectorsMouse embryonic stem cellsPuromycin selectionRNA interferenceTransductionpGreenPuroshRNA
در همین زیرشاخه

مقاله‌های مرتبط

PubMed2027

A Defined Strategy for Multi-Lineage Differentiation of Gastric Organoids.

In the gastric glands, adult stem cells differentiate into multiple epithelial lineages, including pit mucous cells, acid-secreting parietal cells, and enzyme-producing chief cells. Efficient and controllable lineage specification from adult gastric stem cells is essential for modeling gastric homeostasis and disease in vitro. Organoids are a good model for investigating cell differentiation and organ formation. However, methods to ach…

PubMed2027

A Standardized Protocol for Generating iPSC-Derived Human Microglia for Functional Genomic Assays.

Human induced pluripotent stem cell (iPSC)-derived microglia (iMG) provide an in vitro experimental system for studying human microglial biology, neuroinflammation, and genetic risk mechanisms associated with neurological disease. This chapter describes a standardized, scalable, and reproducible protocol for the differentiation of human iPSCs into functional microglia-like cells, with particular emphasis on applications in transcriptio…

PubMed2027

Alkaline Phosphatase Staining of Embryonic Stem Cells.

Alkaline phosphatase (AP) is a widely utilized histochemical marker for assessing the pluripotent state of embryonic stem (ES) cells. Mouse ES cells maintained in an undifferentiated state exhibit high levels of tissue-nonspecific alkaline phosphatase (TNAP) activity, which sharply declines upon differentiation. AP staining provides a rapid, cost-effective, and reliable method to evaluate ES cell colony morphology, confirm maintenance …

PubMed2027

An Electroporation-Based Protocol for Ex Vivo Base Editing: From Design to Quantitative Assessment.

Base editing is a CRISPR variant approach that enables single-nucleotide conversions without generating double-strand breaks. Cytosine and adenine base editors mediate C•G to T•A and A•T to G•C transitions, respectively, by coupling a deaminase to a catalytically impaired Cas9, a modified nuclease that lacks DNA cleavage activity but retains DNA binding capability. By avoiding double-strand breaks, base editing limits reliance on unpre…