Methods for Processing Stem Cell-Derived Organoids for Histological and Immunofluorescence Staining.

چکیده اصلی

Intestinal stem cell (ISC)-derived organoids provide a physiologically relevant 3D culture system to model intestinal biology, regeneration, and disease mechanisms. Their complex architecture, recapitulating crypt structures, poses challenges for downstream histological and immunohistochemical analyses, necessitating optimized processing, and staining protocols. Here, we describe robust workflows for the fixation, embedding, sectioning, and staining of ISC-derived organoids. Each method is detailed stepwise, with emphasis on preserving morphology and antigenicity. We discuss reagent choices, critical technical considerations, and troubleshooting tips to maximize data reproducibility and quality. We have integrated recent advances and best practices, serving as a comprehensive guide for researchers working with intestinal organoids.

ترجمه فارسی چکیده

اورگانوئیدهای مشتق شده از سلول‌های بنیادی روده (ISC) یک سیستم کشت سه بعدی با اهمیت فیزیولوژیک برای مدل‌سازی زیست‌شناسی روده، بازسازی و مکانیسم‌های بیماری فراهم می‌کنند. معماری پیچیده آن‌ها که ساختارهای لایه‌ای را بازتولید می‌کند، چالش‌هایی برای تحلیل‌های هیستولوژیک و ایمونوهیستوشیمیایی ایجاد می‌کند که نیازمند پروتکل‌های بهینه‌سازی شده برای پردازش و رنگ‌آمیزی است. اینجا، ما رویکردهای پایداری برای ثابت‌سازی، درج، برش و رنگ‌آمیزی اورگانوئیدهای مشتق شده از ISC را توصیف می‌کنیم. هر روش مرحله به مرحله با تأکید بر حفظ مورفولوژی و آنتی‌ژنیک بودن توضیح داده شده است. ما انتخاب مواد شیمیایی، نکات فنی حیاتی و نکات عیب‌یابی را برای ماکزیمم کردن تکرارپذیری و کیفیت داده‌ها بحث می‌کنیم. ما پیشرفت‌های اخیر و بهترین شیوه‌ها را ادغام کرده‌ایم تا راهنمای جامعی برای پژوهشگران کار با اورگانوئیدهای روده باشند.

متن کامل اصلی