Whole-Mount Immunostaining of Human Intestinal Organoids.

چکیده اصلی

Human intestinal organoids (HIOs) recapitulate the architecture and cell diversity of intestinal epithelium, hence providing a system for modeling processes like regeneration and tumorigenesis. Here, we describe a detailed whole-mount immunostaining protocol for HIOs to visualize proliferative cell population. Briefly, this protocol includes preparation of HIOs, fixation and permeabilization of tissue, blocking of non-specific binding, antibody crosslinking, and visualization using a confocal microscope. Additionally, the protocol is broadly adaptable for investigating different antibodies, enabling the exploration of other cell signaling processes in HIO models. By eliminating embedding and sectioning steps, this method is both time-efficient and preserves spatial tissue architecture.

ترجمه فارسی چکیده

اندام‌های روده‌ای انسانی (HIOs) معماری و تنوع سلولی اپیتلیوم روده را بازتولید می‌کنند، بنابراین سیستم مناسبی برای مدل‌سازی فرآیندهایی مانند بازسازی و تومورزایی هستند. در اینجا، یک پروتکل جزئی بافت‌برداری ایمونوساینتینگ کل برای HIOs برای مشاهده جمعیت سلولی در حال تقسیم ارائه شده است. به طور خلاصه، این پروتکل شامل آماده‌سازی HIOها، ثابت‌سازی و نفوذپذیری بافت، مسدودسازی اتصال غیراختصاصی، اتصال‌دهی آنتی‌بادی و مشاهده با میکروسکوپ کانفوکال است. علاوه بر این، پروتکل به طور گسترده قابل تطبیق برای بررسی آنتی‌بادی‌های مختلف است و امکان بررسی فرآیندهای سیگنال‌دهی سلولی دیگر در مدل‌های HIO را فراهم می‌کند. با حذف مراحل جاسازی و برش، این روش هم زمان‌بر است و معماری مکانی بافت را حفظ می‌کند.

متن کامل اصلی