Enrichment of Arabidopsis Plasma Membrane Proteins by Sequential Differential Centrifugation.

چکیده اصلی

The plasma membrane (PM) is the primary interface between plant cells and their environment, and its resident proteins mediate key processes such as extracellular signal perception and downstream cellular reprogramming. Yet, PM proteins are typically underrepresented in total protein extracts, and existing enrichment strategies are often laborious and require extensive optimization. Here, a simple and robust workflow is described for enriching PM proteins from Arabidopsis thaliana seedlings using total microsomal membranes obtained by differential centrifugation as starting material. Sequential low- and high-speed spins are used to isolate total microsomal membranes and progressively deplete contaminating organelles, thereby increasing the relative abundance of PM proteins. Coupled with the rich genetic toolkit available in Arabidopsis, this protocol provides an accessible platform for systematic characterization of the PM proteome.

ترجمه فارسی چکیده

غشای پلاسما (PM) اصلی‌ترین واسطه بین سلول‌های گیاهی و محیط اطراف است و پروتئین‌های ساکن در آن فرآیندهای کلیدی مانند درک سیگنال‌های خارجی و بازنویسی سلولی را تنظیم می‌کنند. با این حال، پروتئین‌های PM معمولاً در نمونه‌های پروتئینی کل کمتر دیده می‌شوند و استراتژی‌های غنی‌سازی موجود اغلب پرهزینه و نیازمند بهینه‌سازی گسترده هستند. در اینجا، یک روش کارآمد و ساده برای غنی‌سازی پروتئین‌های PM از جوانه‌های آربیدوپسیس تالیانا با استفاده از غشای میکروسومال کل حاصل از سانتریفیوژ تفاضلی به عنوان ماده اولیه، توصیف شده است. چرخه‌ی سانتریفیوژهای کم‌سرعت و پرسرعت به ترتیب برای جداسازی غشای میکروسومال کل و حذف تدریجی اندامک‌های آلاینده، افزایش نسبت غلظت پروتئین‌های PM را فراهم می‌کند. همراه با ابزار ژنتیکی غنی در آربیدوپسیس، این پروتکل پلتفرمی دسترسی‌پذیر برای بررسی سیستماتیک پروتئوم غشای پلاسما فراهم می‌کند.

متن کامل اصلی