miRNA-34b overexpression alleviates neuromyelitis optica spectrum disorders by regulating the TIA-1-stress granule pathway.

چکیده اصلی

BACKGROUND: Neuromyelitis optica spectrum disorders (NMOSD) are autoimmune demyelinating diseases of the central nervous system. The role of microRNA-34b (miR-34b) in NMOSD pathogenesis remains unclear. This study investigates the expression and functional mechanism of miR-34b in NMOSD, specifically its regulation of the TIA-1-stress granule pathway. OBJECTIVES: To determine the expression level of miR-34b in NMOSD tissues and cell lines and to elucidate whether miR-34b suppresses cell proliferation and promotes apoptosis by directly targeting the TIA-1-stress granule pathway. METHODS: Real-time PCR was used to detect miR-34b expression in 25 NMOSD tissue specimens obtained from a hospital laboratory (13 early-stage, 12 chronic-stage) and 10 normal control tissues, as well as in RGC-5 cells. RGC-5 cells were transfected with miR-34b mimics, inhibitors or negative controls. Cell proliferation was assessed by MTT assay and cell cycle distribution and apoptosis was analyzed by flow cytometry (PI staining and Annexin V-FITC/PI double staining, respectively). The direct binding between miR-34b and the 3'-UTR of TIA-1 mRNA was validated using a dual-luciferase reporter assay. Protein expression levels of TIA-1, SG, HuR, CDK2 and BCL-2 were measured by Western blot. A rescue experiment was performed by co-transfecting miR-34b mimics with a TIA-1 overexpression plasmid. RESULTS: miR-34b was lower in NMOSD vs controls (0.32 ± 0.08 vs. 1.00 ± 0.12, P<0.01), especially in the chronic stage. miR-34b mimics inhibited proliferation, induced G0/G1 arrest (68.5% vs. 52.1%, P<0.01) and increased apoptosis (22.6% vs. 8.3%, P<0.001). miR-34b inhibitor had opposite effects. miR-34b directly bound TIA-1 3'-UTR and downregulated TIA-1, SG, HuR. TIA-1 overexpression partially reversed miR-34b effects. CONCLUSIONS: miR-34b is downregulated in NMOSD. Overexpression of miR-34b suppresses proliferation and promotes apoptosis by targeting the TIA-1-stress granule pathway. Restoring miR-34b may be a therapeutic strategy for NMOSD.

ترجمه فارسی چکیده

اختلالات طیف گلوکوم عصبی-مژیک (NMOSD) بیماری‌های خودایمنی دژنراتیو لایه میلین سیستم عصبی مرکزی هستند. نقش miRNA-34b در بیماری‌زایی NMOSD هنوز روشن نیست. این مطالعه بیان و مکانیسم عملکردی miR-34b در NMOSD، به‌ویژه تنظیم مسیر TIA-1-گرانول استرس را بررسی می‌کند. هدف تعیین سطح بیان miR-34b در بافت‌ها و سلول‌های NMOSD و elucidate آیا miR-34b با هدف‌گیری مستقیم مسیر TIA-1-گرانول استرس، رشد سلولی را مهار کرده و آپوپتوز را تشویق می‌کند. از PCR زمان واقعی برای تشخیص بیان miR-34b در ۲۵ نمونه بافت NMOSD (۱۳ مرحله اولیه، ۱۲ مرحله مزمن) و ۱۰ بافت کنترل نرمال، همچنین در سلول‌های RGC-5 استفاده شد. سلول‌های RGC-5 با mimics، مهارکننده‌ها یا کنترل‌های منفی miR-34b ترنسفکت شدند. رشد سلولی با آزمون MTT و توزیع چرخه سلولی و آپوپتوز با سیتومتری جریان ارزیابی شد. اتصال مستقیم بین miR-34b و 3'-UTR mRNA TIA-1 با آزمون گزارش‌دهنده دو لومرز تأیید شد. سطوح بیان پروتئینی TIA-1، SG، HuR، CDK2 و BCL-2 با وسترن بلات اندازه‌گیری شد. یک آزمایش نجات با ترنسفکت همزمان mimics miR-34b با پلاسمید ابربرونش TIA-1 انجام شد. miR-34b در NMOSD نسبت به کنترل‌ها پایین‌تر بود (۰.۳۲ ± ۰.۰۸ در برابر ۱.۰۰ ± ۰.۱۲، P<0.01)، به‌ویژه در مرحله مزمن. mimics miR-34b رشد را مهار کرد، توقف G0/G1 ایجاد کرد (۶۸.۵٪ در برابر ۵۲.۱٪، P<0.01) و آپوپتوز را افزایش داد (۲۲.۶٪ در برابر ۸.۳٪، P<0.001). مهارکننده miR-34b اثرات متضاد داشت. miR-34b به 3'-UTR TIA-1 متصل شد و TIA-1، SG و HuR را کاهش داد. ابربرونش TIA-1 اثرات miR-34b را تا حدی معکوس کرد. miR-34b در NMOSD کاهش یافته است. ابربرونش miR-34b با هدف‌گیری مسیر TIA-1-گرانول استرس، رشد را مهار کرده و آپوپتوز را تشویق می‌کند. احیای miR-34b ممکن است استراتژی درمانی برای NMOSD باشد.

متن کامل اصلی